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如何正確選擇液相色譜柱
2012-10-17 [3149]

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一、液相色譜柱選擇方法|

  1.確定分(fen)離目的(de)確定你(ni)的(de)應用(yong)是否要求高分(fen)離度、短(duan)分(fen)析時間、高靈敏度、長(chang)柱(zhu)壽命,低(di)的(de)操縱本錢(qian)等等。

  2.評估分(fen)析(xi)物(wu)的化學性質評估分(fen)析(xi)物(wu)的化學性質..諸如化學結構、溶解性、穩定性等(deng)等(deng)。

  3.選(xuan)擇合(he)適的色譜(pu)(pu)柱(zhu)了(le)解(jie)色譜(pu)(pu)填料(liao)的物(wu)理和化學性質。

  二、液相色譜柱選擇方法|


  A填料基質

  1.硅膠(jiao)(jiao)基質:純度高本錢低,強度大(da),化學修飾輕易,但pH值范圍有(you)限。大(da)多硅膠(jiao)(jiao)基質填料(liao)在pH2-8之間穩定,但經過特殊修飾的硅膠(jiao)(jiao)鍵合相可以(yi)穩定在pH1.5-10。

  2.聚(ju)合(he)物基質:應用pH值范圍(wei)寬,溫度(du)穩定(高(gao)溫可以達到80度(du)以上),機械強度(du)小(xiao)。

  B顆粒外形

  大(da)多現代HPLC填(tian)料都是(shi)球(qiu)(qiu)形(xing)顆(ke)粒(li),但有時是(shi)不規則的(de)顆(ke)粒(li)。球(qiu)(qiu)形(xing)顆(ke)粒(li)提供較低(di)的(de)柱壓、較高的(de)柱效和(he)穩定性以及較長的(de)柱壽(shou)命在(zai)使用高粘度的(de)活(huo)動相(xiang)時;不規則顆(ke)粒(li)有較大(da)比表面積和(he)相(xiang)對低(di)廉(lian)的(de)價(jia)格。

  C顆粒粒徑

  粒徑(jing)越(yue)小柱效(xiao)越(yue)高、分離度越(yue)高,但同時會導致較(jiao)高柱壓降。選擇(ze)1.5-3μm的填料以解決一(yi)些復(fu)雜樣品,UPLC可(ke)以使用(yong)1.5μm的填料;另外10μm或更大(da)粒徑(jing)的填料用(yong)作半制備或制備柱。

  D含碳量

  含(han)碳(tan)量(liang)指的(de)(de)(de)是硅膠(jiao)表面鍵(jian)合(he)相的(de)(de)(de)比例,與比表面積(ji)和鍵(jian)合(he)覆蓋度(du)等(deng)有關(guan)。高含(han)碳(tan)量(liang)進步柱容量(liang)、分辨率(lv)及分析(xi)(xi)時間(jian),用于要求高分離度(du)的(de)(de)(de)復雜樣(yang)品(pin);低含(han)碳(tan)量(liang)分析(xi)(xi)時間(jian)短、展現不同的(de)(de)(de)選擇性,用于快(kuai)速分析(xi)(xi)簡單樣(yang)品(pin)及需要高含(han)水活動相條(tiao)件的(de)(de)(de)樣(yang)品(pin)。一(yi)般(ban)C18的(de)(de)(de)含(han)碳(tan)量(liang)在7-19%不等(deng)。

  E孔徑和比表面積

  HPLC吸附介(jie)質是多孔的(de)(de)顆(ke)粒,盡大(da)多數的(de)(de)反應(ying)表面于孔內(nei)。因(yin)此(ci),分子必須進進孔內(nei)才能被吸附和分離。

  孔(kong)徑(jing)和比(bi)表面積是相(xiang)輔相(xiang)成的(de)(de)兩個概(gai)念(nian)。孔(kong)徑(jing)小比(bi)表面積大(da),反之(zhi)亦然。比(bi)表面積大(da),增加(jia)樣(yang)品(pin)與鍵合(he)相(xiang)之(zhi)間的(de)(de)反應(ying),增加(jia)保存,上樣(yang)量和復雜成分(fen)的(de)(de)分(fen)離度(du);比(bi)表面積小,平(ping)衡時(shi)間快,適合(he)梯(ti)度(du)分(fen)析。

  F孔容和(he)機械強度(du)

  孔容,又稱(cheng)“孔體積(ji)”。指單位顆粒(li)的(de)(de)空隙體積(ji)大(da)小。它能(neng)很(hen)好的(de)(de)反應(ying)填(tian)料(liao)的(de)(de)機械強度。孔體積(ji)大(da)的(de)(de)填(tian)料(liao)相對(dui)孔體積(ji)小的(de)(de)填(tian)料(liao)機械強度要略弱(ruo)。孔體積(ji)為1.5mL/g或(huo)更小的(de)(de)填(tian)料(liao)大(da)多用于(yu)HPLC分離,而(er)孔體積(ji)大(da)于(yu)1.5mL/g的(de)(de)填(tian)料(liao)使用于(yu)尺(chi)寸排阻色(se)譜(pu)(pu)和低壓色(se)譜(pu)(pu)。

  G封端封端

  封(feng)(feng)(feng)端(duan)能(neng)夠(gou)降低極性(xing)堿性(xing)化合物由于與裸(luo)露(lu)的硅醇基相(xiang)互作用而產生的拖尾(wei)峰。不封(feng)(feng)(feng)端(duan)鍵合相(xiang)相(xiang)對封(feng)(feng)(feng)端(duan)鍵合相(xiang)會產生不同的選擇性(xing),尤其是極性(xing)樣品。


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